а√天堂最新版在线,久久国产精品亚洲精品,成人无码区免费视频,亚洲精品乱码久久久久久按摩

您好,歡迎進(jìn)入上海莼試生物技術(shù)有限公司網(wǎng)站!
全國服務(wù)熱線:13585831301
上海莼試生物技術(shù)有限公司
您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 多瘤病毒(BK) 核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)反應(yīng)流程常規(guī)程序

多瘤病毒(BK) 核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)反應(yīng)流程常規(guī)程序

瀏覽次數(shù):1220發(fā)布日期:2020-10-28

多瘤病毒(BK) 核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)反應(yīng)流程常規(guī)程序

將PCR反應(yīng)所需的成分配置完后,在PCR儀上于94-96℃預(yù)加熱幾十秒至幾分鐘,使模板DNA充分變性,然后進(jìn)入擴(kuò)增循環(huán)。在每一個循環(huán)中,先于94℃保持30秒鐘使模板變性,然后將溫度降到復(fù)性溫度(一般50-60℃之間),一般保持30秒鐘,使引物與模板充分退火;在72℃保持1分鐘(擴(kuò)增1kb片段),使引物在模板上延伸,合成DNA,完成一個循環(huán)。重復(fù)這樣的循環(huán)25~35次,使擴(kuò)增的DNA段大量累積。后,在72℃保持3-7min,使產(chǎn)物延伸完整,4℃保存。

2.復(fù)性(退火)和延伸溫度

復(fù)性的溫度是PCR擴(kuò)增是否順利的關(guān)鍵因素,通常在50-60℃之間。具體的溫度主要由引物的Tm值決定。延伸溫度絕大多數(shù)設(shè)定為72℃。如果復(fù)性的溫度很高,可以將延伸溫度和復(fù)性溫度設(shè)置成同一溫度,變成二步法PCR。

3.反應(yīng)時間

變性步驟一般使用30秒鐘,如果模板的G+C含量較高,或直接用細(xì)胞做模板,變性時間可適當(dāng)延長。復(fù)性時間有30秒種一般是足夠的。延伸時間由擴(kuò)增產(chǎn)物的大小決定,一般采用1kb用1分鐘來保證充足的時間。

4.循環(huán)次數(shù)

循環(huán)次數(shù)主要與模板的起始數(shù)量有關(guān),在模板拷貝數(shù)為104~105數(shù)量級時,循環(huán)數(shù)通常為25~35次。

平臺效應(yīng)(plateaueffect):PCR擴(kuò)增過程后期會出現(xiàn)的產(chǎn)物的積累按減弱的指數(shù)速率增長的現(xiàn)象。原因:底物和引物的濃度已經(jīng)降低,dNTP和DNA聚合酶的穩(wěn)定性或活性降低,產(chǎn)生的焦磷酸會出現(xiàn)末端產(chǎn)物抑制作用,非特異性產(chǎn)物或引物的二聚體出現(xiàn)非特異性競爭作用,擴(kuò)增產(chǎn)物自身復(fù)性,高濃度擴(kuò)增產(chǎn)物變性不*。

5.PCR反應(yīng)液的配制

PCR反應(yīng)體系的配置方式有時也會影響反應(yīng)的正常進(jìn)行。常規(guī)方法與其它酶學(xué)反應(yīng)一樣,在后加入DNA聚合酶。早期的PCR儀沒有帶加熱的蓋子,要求在反應(yīng)液上覆蓋一層礦物油,防止水分蒸發(fā)。

對于使用具3’-5’外切活性的高溫DNA聚合酶時,有時會擴(kuò)增不出產(chǎn)物。在遇到這個問題時,如果將反應(yīng)成分分開配制,A管含模板、引物和dNTP,以及調(diào)整體積的H2O,B管含緩沖液、DNA聚合酶和水,然后再將兩管溶液混合起來,可較好地克服這個問題。

按照常規(guī)的方法配制反應(yīng)體系,有時會出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增的問題。熱啟動(hotstart)PCR操作方式可較好解決這一問題。將dNTP、緩沖液,Mg2+和primer先配制好,然后加入一粒蠟珠(如AmpliWaxPCRQam100),加熱熔化,再冷卻,使蠟將溶液封住,后加入模板和DNA聚合酶等剩余成分。只有當(dāng)PCR反應(yīng)進(jìn)入高溫階段后,蠟層熔化,所有反應(yīng)成分才會混合在一起。

Contact Us
  • 聯(lián)系QQ:3004972506
  • 聯(lián)系郵箱:sdfskdfhs3004972506@qq.com
  • 傳真:86-021-60443211
  • 聯(lián)系地址:上海嘉定區(qū)澄瀏中路3404號

掃一掃  微信咨詢

©2024 上海莼試生物技術(shù)有限公司 版權(quán)所有  備案號:滬ICP備17029297號-3  技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)    GoogleSitemap    總訪問量:93977 管理登陸

国产欧美日韩在线另类图片| 人妻无码αv中文字幕久久| 国产日韩一区在线观看| 成人国产精品秘片多多| 精产国品一二三产区999999| 久久国产乱子伦精品在| 久久婷婷大香萑太香蕉av人| 九九热99这里只有精品| 亚洲A级成人片在线观看| 狠狠色丁香婷婷久久综合不卡| 国产精品资源网在线观看| 国产女人18毛片水真多18精品| 久久久久久精品免费非洲| 日本丰满大乳人妻无码苍井空| 国产成人欧美亚洲日韩电影| 久久成人国产精品免费软件| 亚洲国产天堂久久综合| 国内美女精品久久久久| 亚洲视频一区在线观看| 欧美国产日产一区二区| 九九免费的视频| 少妇爆乳无码AV专区网站寝取| 又大又硬又粗又黄的视频免费看| 夜夜影院未满十八勿进| 99久久国产综合精品女同| 国产精品高清一区二区不卡片| 亚洲综合区图片小说区| 国产亚洲精品欧洲在线观看| 成人无码免费视频在线播| 中国帅男同志CHINAGAY| 欧美精品在线视频播放| 国产天堂亚洲国产碰碰| 私人午夜性爽快影院6080| 韩国理伦免费电影| 国产精品全国探花在线观看| 国产欧美综合网| 99久久免费精品国产男女性高| 中文字幕日韩精品欧美一区| 天天做天天爱夜夜爽毛片毛片| 无码日韩精品一区二区人妻| 98国产精品永久在线观看|